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技術(shù)文章 / article
細胞收到后需要注意些什么問題
2021-11-19 瀏覽次數(shù)：1230
一.收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。
二.冷凍細胞解凍程序:
1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單上基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它zhi定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細胞適應(yīng)后，方進行所需之實驗。
2.FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細胞而言差異大，請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單上的血清種類培養(yǎng)。
3.將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺。
4.依據(jù)細胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對絕大多數(shù)細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍.細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。
惟對少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO 者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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